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胎牛血清選擇及使用常見問題解析

發布時間:2022-11-17 點擊量:129
  胎牛血清選擇及使用常見問題解析 
  1、實驗室如何選擇適合的血清?
  在國內*的血清是GIBCO和HYCLONE,度和使用范圍非常普遍,但是價格普遍偏貴。對于特殊的細胞李記生物采購GIBCO或HYCLONE血源,同樣經過檢測,用實在的實驗數據確定采購批次,而不是迷信品牌。
  2、胎牛血清和小牛血清的區別及注意事項?
  來源不同:新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛,而胎牛血清(FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。
  組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同,
  使用濃度不同:一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。
  注意事項:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可。
  3、怎樣儲存和解凍血清避免產品質量受損?
  首先需要將血清產品從冷凍箱中取出,先放置于2~8℃冰箱使之溶解,然后放在室溫中使之全融。在融解過程中需要不定時的輕微晃動,使血清成分均勻,減少融化過程中產生沉淀機會。
  其次,血清長時間存放于2-8℃時,可能會聚集各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)而形成沉淀或可見的混濁。因此,我們推薦長期儲存血清需在-20℃以下,并避免反復凍融。
  后,若短期使用存放于4℃時,請勿超過一個月。若在實驗中血清未能一次用完一瓶血清,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內(由于血清結凍時體積會增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發生污染或容器凍裂之情形),再放回冷凍。
  4、血清中包含絮狀沉淀是什么?怎么處理?
  沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。融化過程產生沉淀是正常特性,不會影響產品性質。想要去除這些絮狀沉淀物,有兩種方法:1、可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。2、將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里,大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
  5、如何避免血清中產生沉淀?
  按如下操作可避免沉淀的產生:
  (1)在2~8℃解凍血清時,請將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。同樣原理,分裝凍存的時候,須輕微的均勻搖晃,避免產生氣泡,使溫度與成分均一!
  (2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。
  (3)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。
  (4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
  (5)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
  6、培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
  一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,應該在兩到三周內使用完它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
  7、為什么要熱滅活血清?
  事實上,大部分細胞培養不需要滅火血清,僅在培養部分特殊細胞時進行滅火。如在免疫學研究,培養ES細胞、平滑肌細胞等特殊細胞時,推薦使用熱滅活血清。因為加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。
  8、有必要做熱滅活嗎?
  在大多數情況下不需要熱滅活處理,不但節省時間,更確保血清的質量!因為經過熱處理的血清,沉淀物的行程會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會發現有很多的“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
  9、血清需要做支原體檢測嗎
  支原體污染是世界性問題,有報道指出,支原體輕微污染即可影響200多個基因的表達,Nature雜志從2013年起,要求涉及細胞培養的研究,必須進行支原體檢測。李記生物每批次血清均用支原體檢測試劑進行檢測,可以檢出99.9%的已發現支原體種類,客戶不需要另外檢測,但我們仍然強烈建議培養細胞中定期進行支原體檢測,以排除實驗操作中人為帶入支原體污染。
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